1、鍋內的冷空氣必須排盡。冷空氣的熱膨脹系數大,若鍋內留有冷空氣,當滅菌鍋密閉加熱時,冷空氣受熱會很快膨脹,壓力上升,造成壓力表雖然已指到0.103兆帕,但鍋內溫度卻只有100℃(滅菌不徹底。特別是使用只裝有壓力表沒有溫度計的滅菌鍋時,尤應注意。

　　2、滅菌鍋內裝的物品必須排列疏松,以利蒸汽暢通。滅菌鍋內蒸汽暢通與否,關系到滅菌溫度是否均衡。滅菌物品若放得 過多、過密,會妨礙蒸汽的穿透,造成局部溫度偏低,達不到徹底滅菌。

　　3、滅菌結束應緩慢減壓(排氣)。滅菌結束后,排氣降壓不能太快,應使鍋內壓力徐徐下降到0.034兆帕以下時,方可打開放氣閥,否則排氣減壓太快,使試管、菌種瓶、塑料袋內壓力大于鍋內壓力,引起棉塞沖出管口、瓶口,塑料袋脹破;若為液體培養基滅菌,如減壓太快培養液會突然沸騰從容器內噴出或沾濕棉塞。

　　4、注意防止棉塞潮濕。滅菌時,因鍋內蒸汽在鍋的內壁會形成凝結水,沿鍋壁下流,浸濕棉塞。潮濕的棉塞在培養過程中,容易感染雜菌。為防止棉塞潮濕,裝鍋時,棉塞不能接觸鍋壁,在試管和菌種瓶上面應蓋防水油紙,滅菌結束時,先排放鍋內熱水,再慢慢排放蒸汽降壓。若棉塞潮濕,可利用鍋內余熱烘烤一段時間,干了再出鍋。

　　5、滅菌鍋需經常檢修、保養,保持管道暢通。安全閥失靈是導致高壓滅菌鍋出事故的一個主要原因,因此,應特別注意定期檢查。使用高壓蒸汽滅菌鍋,應有專人負責,以確保安全生產。